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    • 小鼠白細胞介素-1aELISA試劑盒
    產(chǎn)品名稱(chēng):

    小鼠白細胞介素-1aELISA試劑盒

    產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
    廠(chǎng)商性質(zhì): 生產(chǎn)廠(chǎng)家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-17
    Solarbio (Solarbio ®)小鼠白細胞介素-1aELISA試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。將抗小鼠IL-1a單克隆抗體包被在酶標板上;分別加入梯度稀釋的標準品和預稀釋的樣本,標準品和樣本中的小鼠IL-1a會(huì )與酶標板上的包被抗體充分結合;

    產(chǎn)品概述

    品牌SOLARBIO/索萊寶貨號SKEM-0001
    規格48T/96T供貨周期現貨
    主要用途小鼠白細胞介素-1a含量測定應用領(lǐng)域生物產(chǎn)業(yè)

    小鼠白細胞介素-1aELISA試劑盒

    背景介紹:

         IL-1有兩種不同的分子形式,一種IL-1α,由159個(gè)氨基酸組成;另一種稱(chēng)為IL-1β,含153個(gè)氨基酸;兩者由不同的基因分別編碼。人和小鼠IL-1基因定位于2號染色體,均含7個(gè)外顯子。IL-1前體(ProIL-1)為31kDa,通過(guò)蛋白水解酶裂解形成成熟的IL-1分子。IL-1在不同種屬中有較高同源性。在氨基酸水平上,IL-1α和IL-1β在不同種屬同源性分別為60%~70%和75%~78%;但在同一種屬中IL-1α與IL-1β同源性只有25% 。IL-1α和IL-1β分子量約17.5kDa, 等電點(diǎn)分別為5和7,同源性為28%,IL-1α和IL-1β以同樣的親和力結合于相同的細胞表面受體,發(fā)揮相同的生物學(xué)作用。

     

    檢測原理

        Solarbio (Solarbio ®)ELISA試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。將抗小鼠IL-1a單克隆抗體包被在酶標板上;分別加入梯度稀釋的標準品和預稀釋的樣本,標準品和樣本中的小鼠IL-1a會(huì )與酶標板上的包被抗體充分結合;洗板后加入生物素化抗小鼠IL-1a抗體,該抗體會(huì )與板子上包被抗體捕獲的標準品和樣本中的小鼠IL-1a發(fā)生特異性結合;洗板后加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標記的鏈霉親和素,生物素與鏈霉親和素會(huì )發(fā)生高強度的非共價(jià)結合;洗板后加入顯色劑底物TMB,若反應孔中樣品存在不同濃度的小鼠IL-1a,則HRP會(huì )使無(wú)色TMB變成不同深淺(正相關(guān))的藍色物質(zhì),加入終止液后反應孔會(huì )變成黃色;后,在λmax=450 nm(OD=450 nm)處測定反應孔樣品吸光度(OD),樣本中的小鼠IL-1a濃度與OD成正比,通過(guò)繪制標準曲線(xiàn)和四參數擬合軟件便可計算出樣本中小鼠IL-1a的濃度。

     

    原理圖:

     

    注意事項:※※※

    • 試劑盒應在有效期內使用,請不要使用過(guò)期的試劑。
    • 試劑盒未使用時(shí)應保存在2-8℃冰箱,已復溶但未用完的標準品,請丟棄。
    • 試劑盒使用前請在室溫恢復30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
    • 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測,且加入試劑的順序應保持*。
    • 為避免交叉污染,請在試驗中使用1次性試管,槍頭,封板膜()及潔凈塑料容器。.
    • 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結合物的體積較少,在運輸過(guò)程中微量液體會(huì )沾到管壁及瓶 

    蓋上,使用前請離心處理(5-10 S即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時(shí),請用移液器小心吹打幾次。

    • 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來(lái)源試劑盒內含的試

    劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。

    • 為保證結果準確,每次檢測均需做標準曲線(xiàn)。

     

    安全提示:試劑盒中的終止液為酸性溶液,操作人員在使用時(shí)請帶上手套并注意防護;在操作過(guò)程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,如果不慎接觸,請用大量清水清洗;檢測血液樣本及其它體液樣本時(shí),請按國家生物實(shí)驗室安全防護有關(guān)管理規定執行。

     

    試劑盒組成及儲存

    試劑盒組成

    規格(96T)

    規格(48T)

    保存條件

    抗體預包被酶標板

     

    8*12

    8*6

    2-8

    標準品

    2支

    1支

    -20

    標準品/樣本稀釋液(SR1)

    16 ml/瓶

    8 ml/瓶

    2-8

    濃縮生物素化抗體

    120 ul(100X)

    60 ul(100X)

    2-8

    抗體稀釋液(SR2)

    16 ml/瓶

    8 ml/瓶

    2-8

    濃縮酶結合物(避光)

    120 ul(100X)

    60 ul(100X)

    2-8

    酶結合物稀釋液(SR3)

    16 ml/瓶

    8 ml/瓶

    2-8

    濃縮洗滌液 (20×)

    30 ml/瓶

    15 ml/瓶

    2-8

    顯色底物(避光)

    12 ml/瓶

    6 ml/瓶

    2-8

    終止液

    12 ml/瓶

    6 ml/瓶

    2-8

    封板膠紙

    4張

    2張

     

    說(shuō)明書(shū)

    1份

    1份

     

     

     

    自備實(shí)驗器材(不提供,可代購)

    • 酶標儀(主波長(cháng)450nm,參考波長(cháng)630nm)
    • 高精度移液器及一次性吸頭:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
    • 洗板機或洗瓶
    • 37℃孵育箱
    • 雙蒸水,去離子水,量筒等
    • 稀釋用聚丙烯試管

     

     

    樣本收集及儲存:

    • 細胞培養上清:

    將細胞培養基移無(wú)菌離心管,在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存(24小時(shí)內檢測可放入2-8℃儲存),避免反復凍融。

    • 血清樣本:

    室溫血液自然凝固20 min后,在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存(24小時(shí)內檢測可放入2-8℃儲存),保存過(guò)程中如有沉淀,請再次離心,避免反復凍融。

    • 血漿樣本:

    將全血收集到含抗血凝劑的管中,根據標本的實(shí)際要求選擇EDTA,檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合20 min,在4℃條件下1000×g離心10 min,然后將上清等量分裝于小EP管并于-20℃下保存(24小時(shí)內檢測可放入2-8℃儲存),避免反復凍融。

     

    注意:血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,以免影響檢測結果;如果樣本中的靶標物檢測濃度高于標準品的高值,請將樣品做適當倍數稀釋后檢測,建議正式實(shí)驗前做預實(shí)驗以確定稀釋倍數。

     

     

    試劑準備

    • 試劑回溫:先在實(shí)驗前30 min將試劑盒,待測樣本放置于室溫下,濃縮洗滌液如出現結晶,請放入37℃溫浴直到結晶全部溶解。
    • 配制洗滌液:預先計算好稀釋后的洗滌液使用體積,然后用雙蒸水或去離子水將20倍濃縮洗滌液稀釋成1倍應用液,未用完的濃縮洗滌液放入4℃冰箱保存。

    3. 標準品梯度稀釋?zhuān)杭尤霕藴势?樣本稀釋液(SR1)1ml凍干標準品中,靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為2000pg/ml),然后按照以下濃度:2000、1000、 500、 250、125、62.5、31.25、 0 pg/ml進(jìn)行稀釋。復溶過(guò)的標準品原液(2000pg/ml)未用完的應廢棄或根據需要按照一次用量分裝,并將其貯存在-20~-80℃冰箱,具體如下圖。

     

     

    4. 生物素化抗體工作液:預先計算好試驗所需用量,用檢測稀釋液(SR2)將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍應用工作液(稀釋前充分混勻),請在30分鐘內加入到反應孔中。

     

    生物素化抗體工作液具體稀釋方法如下:

    板條

    濃縮生物素化抗體(1:100):μL

    檢測稀釋液(SR2):μL

    2

    20

    1980

    4

    40

    3960

    6

    60

    5940

    8

    80

    7920

    10

    100

    9900

    12

    120

    11880

     

    5. 酶結合物工作液:按每次試驗所需用量配制,用酶結合物稀釋液(SR3)將100倍濃縮酶結合物稀釋成1倍應用工作液(稀釋前離心),請在30分鐘內使用。

     

    酶結合物工作液具體稀釋方法如下:

    板條

    濃縮酶結合物(1:100):μL

    檢測稀釋液(SR3):μL

    2

    20

    1980

    4

    40

    3960

    6

    60

    5940

    8

    80

    7920

    10

    100

    9900

    12

    120

    11880

     

    6. 洗滌方法:

    • 自動(dòng)洗板:甩盡酶標板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,注入洗滌液為300ul/孔,注與吸出間隔為30秒,洗板5次。
    • 手工洗板:甩盡酶標板孔中液體,在厚迭吸水紙上拍干,用洗瓶加入洗滌液300ul/孔,靜止30秒后甩凈酶標板孔中液體,在厚迭的吸水紙上拍干,洗板5次。

     

    檢測步驟:

    結果判斷

    1.用酶標儀 450 nm 波長(cháng)測定 OD 值。選擇雙波長(cháng)檢測,參考波長(cháng)為 630 nm。如不能進(jìn)行雙波長(cháng)檢測,請用 450 nm 的OD測定值減去630 nm的OD測定值。

    2.計算標準品、樣品的平均OD值:每個(gè)標準品和標本的OD值應減去零孔的OD值

    3.以標準品濃度為橫坐標,吸光度OD值為縱坐標,用軟件繪制標準曲線(xiàn),樣品中IL-1a含量可通過(guò)對應OD值由標準曲線(xiàn)換算出相應的濃度。

    4.若標本OD值高于標準曲線(xiàn)上限,應做適當稀釋后重新檢測,計算濃度時(shí)再乘以稀釋倍數。

     

    參數表征

     

    1. 數據及標準曲線(xiàn)

     

    標準品濃度(pg/ml)

    OD值1

    OD值2

    平均值

    矯正值

    0

    0.055

    0.059

    0.057

    ---

    31.25

    0.125

    0.133

    0.129

    0.072

    62.5

    0.215

    0.206

    0.210

    0.153

    125

    0.352

    0.322

    0.337

    0.280

    250

    0.486

    0.443

    0.464

    0.407

    500

    0.958

    0.968

    0.963

    0.906

    1000

    1.636

    1.652

    1.644

    1.587

    2000

    2.346

    2.403

    2.374

    2.317

     

     

    本圖僅供參考,應以當次試驗標準品繪制的標準曲線(xiàn)計算小鼠IL-1A的樣本含量

     

     

    2. 靈敏度:

    低可檢測小鼠IL-1a濃度達15pg/ml,

    20個(gè)零標準品濃度OD的平均值加上兩個(gè)標準差,計算相應的可檢測濃度。

     

    3. 特異性:

    不與小鼠IL-1、2、3、4、5、6、7、9、10、12、13反應,大鼠IL-1β等反應

     

    4. 重復性:

    板內,板間變異系數<10%

     

    5. 回收率:

    在選取的健康小鼠血漿、細胞培養上清中加入 3 個(gè)不同濃度水平的小鼠 IL-1a,計算回收率。

    樣本類(lèi)型

    平均回收率(%)

    范圍(%)

    血漿

    95

    86-108

    細胞培養上清

    96

    91-111

     

    6. 線(xiàn)性稀釋

    分別在選取的4 份健康小鼠血漿和細胞培養上清中加入高濃度小鼠 IL-1a,在標準曲線(xiàn)動(dòng)力學(xué)范圍內進(jìn)行稀釋?zhuān)u估線(xiàn)性。

    稀釋比例

    回收率(%)

    血漿

    細胞培養上清

    1:2

    平均回收率(% )

    93

    102

    范圍(%)

    82-99

    96-112

    1:4

    平均回收率(% )

    89

    96

    范圍(%)

    84-103

    93-106

    1:8

    平均回收率(% )

    95

    93

    范圍(%)

    83-112

    88-103

    1:16

    平均回收率(% )

    102

    93

    范圍(%)

    96-113

    90-107

     

    參考文獻

    1. Greenfeder, S.A. et al. (1995) J. Biol. Chem. 270:13575.

    2. Wesche, H. et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:7727.

    3. Sims, J.E. et al. (1994) Clin. Immunol. Immunopathol. 72:9.

    4. Sims, J.E. et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6155.

    5. Colotta, F. and A. Mantovani (1994) Trends Pharmacol. Sci. 14:138.

    6. Svenson, M. et al. (1993) Cytokine 5:427.

    7. Giri, J.G. et al. (1994) J. Immunol. 153:5802.

     

     

    常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法

    問(wèn)題

    可能原因

    解決方法

     

     

    高背景或陰性對照值偏高

    洗板不充分

    將洗滌液注入反應孔充分洗滌,*拍干孔中液體

    酶結合物過(guò)量

    檢查酶稀釋度,按說(shuō)明書(shū)標識的稀釋度稀釋

    底物污染

    加底物前檢查底物是否為透明無(wú)色,勿用變藍的底物,重新用新的底物試驗

    陰性對照孔被陽(yáng)性對照污染

    注意洗滌時(shí)不要把洗液溢出孔外,不使陰陽(yáng)對照孔液體漣接一起

    不同批次試劑混用

    檢查試劑批號,勿用不同批次試劑

     

     

     

    顯色信號弱

    試劑過(guò)期

    檢查試劑盒有效期,請勿用過(guò)期試劑

    孵育時(shí)間過(guò)短

    按說(shuō)明書(shū)中規定的時(shí)間孵育

    試劑污染

    檢查試劑是否污染,請勿用污染的試劑

    酶標儀濾光片不匹配

    檢查酶標儀設置及濾光片是否匹配

    試劑盒平衡不充分

    確保試劑盒試驗前平衡室溫

    顯色時(shí)間不夠

    增加底物顯色時(shí)間

     

     

    無(wú)顯色信號

    檢測抗體、酶、或顯色劑漏加

    檢查試驗操作流程,重復試驗

    酶被疊氮鈉污染

    使用重新配制的試劑

    試劑添加順序有誤

    檢查復核試驗添加順序、流程,重復試驗

    標曲佳但樣品孔無(wú)信號

    樣品中靶標物含量低或樣品中無(wú)靶標物

    設置陽(yáng)性對照,重復實(shí)驗

    樣品基質(zhì)效應影響檢測

    重新稀釋樣品后復測

    標曲佳但樣品信號偏高

    樣品中待檢物含量超過(guò)標準曲線(xiàn)范圍

    重新稀釋樣品后復測

    邊緣效應

    孵育溫度不均衡

    孵育時(shí)每步均使用新的封板膠紙,避免在環(huán)境溫度變化大的地方孵育,勿疊放反應板

     

    小鼠白細胞介素-1aELISA試劑盒訂購說(shuō)明:

    1、絕大部分產(chǎn)品備有現貨,一般情況下都能訂貨當日發(fā)貨。 
    2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預訂,海外期貨則需要提前3-6周預訂。 
    3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì )因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動(dòng)以訂貨當日新價(jià)格為準。 
    4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整,部分城市可到17點(diǎn)整,因超過(guò)截止時(shí)間造成當日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
    5、請辦理完貨款后,將底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

     

    運輸說(shuō)明:

    極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運輸過(guò)程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái),再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶(hù)的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩定如一,為您的實(shí)驗保駕護航。
    低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái),再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴實(shí)密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶(hù)的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩定如一,為您的實(shí)驗保駕護航。
    常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,準確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中。

     

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